如何进行流式细胞术？

Q:我用AAV病毒感染293tt细胞以检查我的CAR分子的表达。根据方案，我将收集细胞并在PBS中洗涤，而不是用抗体（Fab片段抗体）染色用于流式细胞术。我想存储我的细胞，并希望在几天后运行FACS。

我研究了一些方法，他们说我需要用PBS修复它，当我使用时，我需要用抗体染色。然而，在某处，我读到需要用PBS清洗，用抗体染色30分钟，然后用PBS清洗储存。

所以哪个是更好的选择，我可以用PBS清洗并存放。或者我还需要用Ab染色它而不是储存它？如果我需要用抗体染色，我可以用它染30分钟，或者我需要用抗体染色直到我用它？

A：我通常在染色后将细胞固定用于流式细胞术。然后我搅拌样品的最长时间是40天，这对我的结果没有影响。这是协议。

1.用2％FCS洗涤pbs中的染色细胞。

2.在pbs溶液中加入3％pfa（多聚甲醛），在室温下孵育30分钟。

3.孵育后用pbs洗涤细胞并加入pbs并将其储存在冰箱中。

您需要确保样品在密封的小瓶或parrafilm盖板中长期储存，以防止干燥。

或者，我也尝试将1％pfa中的染色和洗涤的细胞重新悬浮于pbs中并储存直至使用而无需任何洗涤步骤。